Tinción diferencial: Tinción de Gram

TINCIÓN DE GRAM … (RESOLUCIÓN OIV/OENO 206/2010)
Objetivo: 
La tinción de Gram se usa para diferenciar las lactobacterias (grampositivas) de las acetobacterias (gramnegativas), además de observar su morfología.
Comentarios
Cabe recordar que la tinción de Gram no basta para extraer conclusiones, dado que puede haber otras bacterias además de las lácticas y las acéticas.
Principio:
Este color se basa en la diferencia de estructura y composición química de las paredes celulares de las bacterias grampositivas y gramnegativas. Las paredes celulares de las gramnegativas, ricas en lípidos, tienen muy poca cantidad de peptidoglicano. Esto permite la penetración de alcohol y la eliminación del complejo violeta de genciana-iodina, dejando la célula sin color, que se vuelve a teñir de rojo con safranina. En cambio, las paredes celulares de las bacterias grampositivas contienen mucho peptidoglicano y una baja concentración de lípidos. Ello hace que la gruesa pared de peptidoglicano y la deshidratación provocada por el alcohol no permitan la eliminación del color violeta o azul oscuro del complejo violeta de genciana-iodina.

La técnica de tinción de Gram admite varias modificaciones. Pierde su utilidad cuando se realiza en un cultivo demasiado antiguo. Por ello la bacteria tiene que estar en una fase de crecimiento exponencial en 24 a 48 horas.

Soluciones:
El agua que se use tiene que ser destilada.
1. Solución de violeta de genciana
Preparación: Pese 2g de violeta de genciana (o violeta cristal), póngalos en un matraz Erlenmeyer de 100 ml y disuélvalos en 20 ml de alcohol al 95%. Disuelva 0,8g de oxalato de amonio en 80 ml de agua destilada. Mezcle las dos soluciones y use la mezcla una vez hayan transcurrido 24 horas. Fíltrela con papel cuando la vaya a usar. Manténgala lejos de la luz, en un matraz oscuro.
2. Solución Lugol:
Preparación: Disuelva 2g de yoduro potásico en una cantidad mínima de agua (4 a 5 ml) y disuelva 1g de iodina en esta solución saturada. Aumente el volumen hasta 300 ml con agua destilada. Manténgala lejos de la luz, en un matraz oscuro.
3. Solución de safranina:
Preparación: Pese 0,5g de safranina en un matraz Erlenmeyer de 100 ml, disuelva con 10 ml de alcohol al 95% y añada 90 ml de agua. Remueva. Manténgala lejos de la luz, en un matraz oscuro.
Preparación:
Preparación de la muestra
Partimos de un cultivo de bacterias  en un medio líquido o sólido. Tome una pequeña cantidad de las bacterias del cultivo joven (después de centrifugar el cultivo líquido) o directamente del medio sólido con una espiral o con una varilla y mezcle una gota del agua esterilizada.
Ponga la muestra sobre un portaobjetos, esparciendo una gota de la suspensión microbiana. Deje que se seque la muestra y fíjela, pasando rápidamente el portaobjetos tres veces por la llama de un mechero de Bunsen o equivalente. Cuando se haya enfriado, proceda con la tinción.
Tinción
Vierta unas pocas gotas de solución de violeta de genciana en la muestra fija. Deje que reaccione durante 2 minutos y lave con agua.
Vierta una o dos gotas de solución Lugol. Deje que reaccione durante 30 segundos. Lave con agua y seque con papel de filtro.
Vierta alcohol al 95% y deje que actúe durante 15 segundos. Enjuague con agua y seque con papel de filtro.
Vierta unas pocas gotas de solución de safranina y deje que actúe durante 10 segundos. Lave con agua y seque con papel de filtro.
Ponga en la muestra una gota de aceite de inmersión.
Con el objetivo de inmersión, observe a través del microscopio en campo claro.
Resultados:
Las lactobacterias quedan de color violeta o azul oscuro (grampositivo). Las acetobacterias quedan de color rojo (gramnegativo).

ÁCIDOS NUCLEICOS: Actividades

Una de actividades… 

Te propongo un poco de todo para repasar este bloque.. actividades de respuesta directa teórica, actividades a partir de imágenes y aplicación de Chargaff..  tienes donde elegir.

 
1 Describa las funciones más relevantes de los nucleótidos. Cite un ejemplo de nucleótido que participe en cada una de ellas

2 En relación con los ácidos nucleicos, indique: 
3 Explique las funciones de los distintos tipos de RNA que participan en la síntesis de proteínas.
6  Diferencias y semejanzas en la estructura , función y localización del ADN y ARN.
7 En relación con los ácidos nucleicos, indique:

  • ¿Mediante qué proceso podríamos obtener una molécula de ARN?.¿En qué consiste?
  •  Escribe la molécula resultante . ¿Qué tipo de ARN sería?
    •  ¿Que tipos de ARN intervienen en la síntesis de proteínas y 

Cuál es la función que realizan?

  • ¿Cómo sería la cadena complementaria del ADN? Escríbela

10  En relación con la figura adjunta, responda las siguientes
13 El análisis del ácido nucleico de un virus ha dado los siguientes resultados: A 24%, G 31%, T 33% y C 12%. ¿Qué conclusiones se pueden obtener acerca del tipo de ácido nucleico del virus?]. Razone la respuesta.

a)¿Cuáles son los componentes de un nucleótido?.
b) ¿Cuáles son las bases nitrogenadas derivadas de la purina?
c) ¿y de la pirimidina?
d)¿Qué bases nitrogenadas entran a formar parte en la composición del RNA y del DNA?
e) ¿Qué tipo de enlaces soportan la estructura de los ácidos nucleicos?
 
 
4 Defina los siguientes conceptos: replicación, transcripción y traducción ¿En qué parte de la célula procariota y eucariota tienen lugar estas funciones celulares?
 

5  Indique de forma esquemática cómo se realiza la expresión de la información genética desde ADN a proteína. 

 

¿Qué son los ac nucleicos?
¿Cuáles son los componentes?
¿Cómo se forma un nucleótido?

La secuencia de bases de una molécula de ADN es AGATTGCGCATA ….

ACTIVIDADES CON IMÁGENES
El siguiente esquema representa la estructura de una molécula biológica:
a)Indique de qué molécula se trata e identifique los elementos señalados con las letras A, B y C.
b)¿Qué representan las líneas de puntos?. 
c)¿Qué indican los números 5’ y 3’? 
b).‐ Cite dos procesos fundamentales para la vida relacionados con esta molécula y explique el significado biológico de cada uno. 



cuestiones:
a).‐ Nombre el tipo de molécula de que se trata .Cómo se denominan sus monómeros y cuál es su composición.

b).‐ ¿Cómo se denomina el proceso por el cual esta molécula se
duplica? 
c) Realice una breve descripción de la estructura de la molécula que observa

11 A la vista de la imagen, responda las siguientes cuestiones:
a).‐ ¿Qué tipo de monómeros están implicados en la reacción?  ¿Cuáles son sus componentes? . Indique el nombre de las posibles bases que puedan formar parte de ellos. Describa dos funciones de estos monómeros.
b).‐ ¿Qué nombre recibe el enlace que se produce entre los monómeros? . Indique los grupos químicos que intervienen en su formación . 
c)¿Qué nombre reciben las moléculas biológicas formadas por gran cantidad de monómeros unidos por enlaces de este tipo? 
d) Indique en qué lugares de la célula se realiza este proceso 


12 En relación con la figura adjunta, conteste las siguientes cuestiones:
a).- ¿Qué representa el conjunto de las figuras?. ¿Qué representan las figuras indicadas con las letras A, B y F? 
b).- ¿Cuál o cuáles de esas estructuras se pueden observar al microscopio óptico y cuándo se observan? . 
c)¿Cuál es la finalidad de que la estructura representada en A acabe dando lugar a la estructura representada en F?
 
Ejercicios de aplicación de las leyes de Chargaff
 
 
14 El material genético de los virus DNA puede estar formado por una sola cadena de nucleótidos (DNA unicatenario) o por dos (DNA bicatenario). Si el análisis cuantitativo del DNA de un virus demuestra que tiene un 40% de G y un 30% de A, ¿puede afirmarse que sea un DNA unicatenario? Razone la respuesta
 

15 Si la razón A + G / T + C en una de las hebras de ADN es 0’6 ¿Cuánto valdrá en la hebra complementaria? ¿Cuánto valdrá en la molécula completa? Responde razonadamente

 

ACIDOS NUCLEICOS 2

Conceptos genéticos y algo mas..

 

GLOSARIO  GENÉTICO HABLADO  ENLACE AQUI

ESTRUCTURA DNA

CONDENSACION DEL  DNA

Os incluyo un video con los distintos niveles de condensación del DNA. Está en  ingles pero no  por ello deja de entenderse. Las imagenes son muy claritas y tienen subitulos.

CARIOTIPO


Se llama cariotipo al número, forma y tamaño de los cromosomas de una determinada especie. Esto es, al conjunto de los cromosomas de una célula. Los cromosomas de una célula pueden ser observados al microscopio óptico, fotografiados y sobre estas fotografías pueden contarse y medirse con toda facilidad. Los cromosomas pueden recortarse de la fotografía y ordenarse por su tamaño, de mayor a menor, y por la posición del centrómero. Esta distribución ordenada de los cromosomas recibe el nombre de idiograma.

La figura siguiente muestra el cariotipo del ratón (Mus musculus)

Si observas verás que  el ratón tiene 20 pares de cromosomas, total 40
El número de cromosomas es fijo para cada especie.
especie diploide (2n), es decir  que contiene  dos juegos de cromosomas..
Ratón 40 ( 20 pares )
Conejo 44
Cobayo 16
Rata 42
Hamster 44
Perro 78
Humano 46
El número de cromosomas de las células somáticas  siempre par, ya que cada célula somática dispone de dos juegos de cromosomas y cada cromosoma de una serie tiene su homólogo en la otra. Los cromosomas homólogos provienen cada uno de un progenitor. Es por esto que contienen información para los mismos caracteres pero no necesariamente la misma información, pues uno de los progenitores ha podido aportar un alelo para un gen y el otro progenitor otro.
En los mamíferos los cariotipos del macho y de la hembra son diferentes. La hembra tiene dos cromosomas X (XX-homogamética) y el macho tiene un cromosoma X y otro Y (heterogamético- XY). Estos cromosomas que determinan el sexo se llaman, sexuales. El resto de los cromosomas se denominan autosomas.


EXPRESION GÉNICA

TEORÍA ENDOSIMBIOTICA

 

PROTEÍNAS


1. Tipos de Aminoácidos

 

 

2. Enlace Peptídico

3. Estructuras de las proteínas

La estructura terciaria informa sobre la disposición de la estructura secundaria de un polipéptido al plegarse sobre sí misma originando una conformación globular.

En definitiva, es la estructura primaria la que determina cuál será la secundaria y por tanto la terciaria..
Esta conformación globular facilita la solubilidad en agua y así realizar funciones de transporte , enzimáticas , hormonales, etc. conformación globular se mantiene estable gracias a la existencia de enlaces entre los radicales R de los aminoácidos. Aparecen varios tipos de enlaces:

  • el puente disulfuro entre los radicales de aminoácidos que tiene azufre.
  • los puentes de hidrógeno
  • los interacciones electrostáticas
  • las interacciones hifrófobas y fuerzas de van der Waals
ESTRUCTURA CUATERNARIA
Esta estructura informa de la unión, mediante enlaces débiles (no covalentes) de varias cadenas polipeptídicas con estructura terciaria, para formar un complejo proteico. Cada una de estas cadenas polipeptídicas recibe el nombre de protómero.
La asociación o unión de las moléculas que forman una estructura cuaternaria, se consigue y mantiene mediante enlaces de hidrógeno, fuerzas de Van der Waals, interacciones electrostáticas y algún que otro puente disulfuro.

4. Clasificación

Se clasifican en :

  • HOLOPROTEÍNAS :Formadas solamente por aminoácidos
  • HETEROPROTEÍNAS: Formadas por una fracción proteínica y por un grupo no proteínico, que se denomina “grupo prostético

5. Funciones

6. Propiedades

Las propiedades de una proteína, incluso su carga eléctrica, dependen de los restos o radicales de los aminoácidos que quedan en su superficie y que podrán interaccionar mediante enlaces covalentes o no covalentes con otras moléculas. A continuación veremos las propiedades más importantes:

Solubilidad.

Las proteínas que tienen conformación filamentosa son insolublesmientras, que las que tienen conformación globular son solubles en agua. Debido al elevado peso molecular que suelen tener forman dispersiones coloidales.

 

La solubilidad se debe a los restos de los aminoácidos superficiales que forman la molécula de la proteína, que tienen grupos polares y grupos que se pueden ionizar, estos grupos establecen puentes de hidrógeno con el agua, formándose alrededor de la molécula de proteína una capa de moléculas de agua llamada capa de solvatación, que impide su unión con otras moléculas de proteínas. Si esta capa de solvatación se rompe, las moléculas de proteínas se unen entre sí formando un agregado insoluble y precipitan. Esto ocurre cuando se añaden iones (sales en disolución) que compiten con las cargas de los restos de los aminoácidos por unirse a las moléculas de agua de la capa de solvatación.

 

Los radicales de los aminoácidos permiten a las proteínas interaccionar con el agua. Si abundan radicales hidrófobos, la proteína será poco o nada soluble en agua. Si predominan los radicales hidrófilos, la proteína será soluble en agua.

 

 

 

Especificidad: de función y de especie

La especificidad se refiere a su función; cada una lleva a cabo una determinada función y lo realiza porque posee una determinada estructura primaria y una conformación espacial propia; por lo que un cambio en la estructura de la proteína puede significar una pérdida de la función.
Además, no todas las proteinas son iguales en todos los organismos, cada individuo posee proteínas específicas suyas que se ponen de manifiesto en los procesos de rechazo de órganos transplantados. La semejanza entre proteínas son un grado de parentesco entre individuos, por lo que sirve para la construcción de”árboles filogenéticos”

Desnaturalización.

Consiste en la pérdida de la estructura terciaria, por romperse los puentes que forman dicha estructura. Todas las proteínas desnaturalizadas tienen la misma conformación, muy abierta y con una interacción máxima con el disolvente, por lo que una proteína soluble en agua cuando se desnaturaliza se hace insoluble en agua y precipita.
La desnaturalización se puede producir por cambios de temperatura, ( huevo cocido o frito ), variaciones del pH… etc En algunos casos, si las condiciones se restablecen, una proteína desnaturalizada puede volver a su anterior plegamiento o conformación, proceso que se denomina renaturalización.

 

Los niveles de organización de la materia viva y las caracteristicas de los seres vivos.

Los seres vivos presentamos una serie de características comunes que nos diferencian de todo aquello que hemos decidido llamar “no vivo”.

RECORDANDO LAS CARACTERÍSTICAS DE LOS SERES VIVOS…

A pesar de su variedad en formas, tamaños, organizaciones, etc… Los seres vivos poseen una
serie de características comunes que las podemos resumir en:

1ª. Todos los seres vivos poseen una composición química semejante y particular, en la que abunda el carbono , el nitrógeno ,el oxigeno y el hidrógeno.

2ª. Todos los seres vivos están formados por células. Hay seres vivos compuestos por una sola célula y se llaman unicelulares y organismos formados por numerosas células, llamándose pluricelulares

3ª. Todos los seres vivos realizan las mismas funciones vitales:

– F. Nutrición: que les proporcionan la materia y la energía que necesitan para vivir
– F. Relación : que les ponen en contacto con el medio que les rodea
– F. Reproducción : que les permiten producir descendientes semejantes a si mismos.

Somos el resultado holístico de una química bien organizada.

Cuando observamos cualquier tipo de materia viva podemos distinguir varios grados de complejidad estructural, que son los denominados niveles de organización. Cada uno de ellos proporciona unas propiedades a la materia viva que no se encuentran en los niveles inferiores.

 Una bonita forma de contarlo lo puedes ver en este enlace.
 En la misma página puedes encontrar información sobre la célula, sus orgánulos etc..